Farmaco

Profili genetici e biomelocolari di predittività della risposta ai farmaci e della aggressività tumorale nei sarcomi muscoloscheletrici

Background
La resistenza multipla ai farmaci (MDR) è un fenomeno multifattoriale che può manifestarsi con il concorso di diversi meccanismi di azione che includono nella maggior parte dei casi la MDR1-P-glicoproteina, la famiglia dei geni della multidrug resistance associate protein (MRP) e la breast cancer resistance associate protein (BCRP). Livelli anomali di espressione di queste proteine in tumori MDR non sono mutualmente esclusivi e la prevalenza di espressione di una o l'altra di queste molecole può dipendere dal tipo e dalla concentrazione di farmaco utilizzato, dalle modalità di selezione e dalle caratteristiche isto-fisologiche delle cellule prese in esame. L' estrema particolarità del fenomeno MDR è stata semplificata per lo più alla presenza/assenza di un singolo meccanismo di trasporto mentre poca o nessuna attenzione è stata rivolta al sistema cellulare nel suo complesso. Ciò ha avuto come conseguenza di escludere dallo studio del fenomeno MDR un gran numero di proteine considerandole ininfluenti per la comprensione dei meccanismi di azione della P-glicoproteina, di MRP e BRCP.
Obiettivi
Lo studio intende verificare se e come la P-glicoproteina svolga funzioni di molecole la cui espressione moduli durante la transizione del fenotipo cellulare da sensibile a resistente. Tali informazioni consentirebbero di tipizzare i tumori MDR in più specifiche sottoclassi alle quali potrebbe corrispondere una maggiore o minore suscettibilità ad un farmaco o ad un trattamento biologico. Altro obiettivo consiste in una analisi sistematica dell'associazione ABC transporters-proteine del citoscheletro per comprendere se il legame osservato fra P-glicoproteina ed ERM sia un fenomeno ristretto ad un tipo cellulare, ad una classe particolare dei meccanismi di trasporto ( per esempio quelli localizzati a livello apicale come la P-glicoproteina, MRP2, MRP4 e BCRP) o se includa anche gli ABC trasporters basolaterali ( MRP1, MRP3, MRP5). Questo studio, rivelando se ed in che modo le molecole che conferiscono il fenotipo MDR siano ancorate al citoscheletro actinico, può fornire elementi utili sulla efficacia e sulla scelta degli oncolitici in relazione al loro meccanismo di azione.
Materiali e Metodi
Le ricerche che intendiamo effettuare verranno sviluppate mediante una serie di studi immunochimici e funzionali che includono:
a) Identificazione delle proteine del citoscheletro co-immunoprecipitate con: i CD44 (cellule: CEM, MCF7, KB, K562, H69, Osteosarcoma); b) P-glicoproteina (cellule: CEM-VBL100, KB.8.5, KBV1, K562inf, Osteosarcoma MDR); MRP1 (cellule: H69Adr, GLC4Adr); BCRP (cellule MCF7/MR).
b) Localizzazione e/o colocalizzazione di CD44 con ERM ( cellule: CEM, KB, K562, H69, Osteosarcoma); P-glicoproteina (cellule: CEM-VBL100, KB.8.5, KBV1, K562inf, Osteosarcoma MDR); MRP1 ( cellule: H69Adr, GLC4Adr); BCRP (MCF7/MR).
c) Analisi del fenomeno apoptotico in risposta al legame di anticorpi anti CD44 ed anti P-glicoproteina in cellule sensibili/resistenti CEM e comparazione dei risultati ottenuti con gli effetti apoptotici prodotti dai diversi anticorpi monoclonali anti P-glicoproteina in sistemi cellulari (cellule: CEM-VBL100, KB.8.5, KBV1, K562inf, Osteosarcoma) che hanno diversamente modulato il CD44 in associazione al fenotipo MDR.
Risultati attesi ed applicazioni
Esaurienti risposte alle questioni sul ruolo biologico della P-glicoproteina in cellule normali e trasformate. Nuovi sistemi di inattivazione della P-glicoproteina e la reversione del fenotipo MDR.