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02/11 - Determinazione dellacido S-fenilmercapturico mediante cromatografia liquida accoppiata a spettrometria di massa con trappola ionica. Cinzia La Rocca, Luigi Turrio Baldassarri, Maria Luisa Casella 2002, ii, 63 p.
Determinazione dell'acido S-fenilmercapturico mediante cromatografia liquida accoppiata a spettrometria di massa con trappola ionica.
Cinzia La Rocca, Luigi Turrio Baldassarri, Maria Luisa Casella
2002, ii, 63 p. Rapporti ISTISAN 02/11
È stato elaborato un metodo analitico strumentale per la determinazione dell'acido S-fenilmercapturico, metabolita urinario del benzene e specifico bioindicatore di esposizione, basato sull'HPLC-MS/MS, utilizzando una interfaccia elettrospray e un analizzatore a trappola ionica. Il metodo prevede la separazione su colonna a fase inversa C18, mediante un gradiente lineare, di un estratto di urina pretrattato. La determinazione è effettuata mediante rivelazione degli ioni positivi, dopo frammentazione dello ione isolato (M+1)+, che si forma per protonazione della molecola. Lo studio è stato effettuato su soluzioni standard di acido S-fenilmercapturico, e poi messo a punto su un campione reale di urine di un soggetto non esposto professionalmente a benzene. Il metodo strumentale sviluppato in questo studio per la determinazione dell'acido S-fenilmercapturico, è caratterizzato da buona precisione (coefficiente di variazione = 4,57% su 5 iniezioni replicate) e da un'accuratezza (stimata al 6,46%) soddisfacente, e la sua elevata sensibilità (10 pg di analita iniettato) permette di rilevare il metabolita del benzene anche a livelli derivanti da basse esposizione ambientali. La sensibilità del metodo è paragonabile a quella permessa da rivelatori spettrofluorimetrici, che però necessitano di derivatizzazione, e superiore a quella di metodi basati su gas cromatografia-spettrometria di massa, sempre dopo derivatizzazione.
Parole chiave: Benzene, Acido S-fenilmercapturico (S-PMA), Bioindicatore di esposizione, HPLC-MS/MS, Elettrospray, Trappola ionica
S-phenylmercapturic acid determination through liquid chromatography and mass spectrometry with ion trap.
Cinzia La Rocca, Luigi Turrio Baldassarri, Maria Luisa Casella
2002, ii, 63 p. Rapporti ISTISAN 02/11 (in Italian)
An analytical method was set up to determine S-phenylmercapturic acid (S-PMA), a benzene urinary metabolite and a specific biomarker. The method is based on HPLC-MS/MS with an electrospray interface and an ion trap analyzer. The separation of the analyte is performed on a pre-treated urine extract by a reversed-phase C18 column; a linear gradient elution is used, whilst the determination is carried out on the daughter ion obtained by fragmentation (MS/MS) of the isolated (M+1)+ ion, in the positive-ion polarity. The (M+1)+, is formed by S-PMA protonation. This study was first set up on S-PMA standard solutions and then tested on a real urine sample of a non professionally exposed subject. The instrumental analytical method developed in this study for the S-phenylmercapturic acid is characterized by a good precision (coefficient of variation= 4.57% in 5 replicated injections), a satisfactory accuracy (an estimated 6.46%) and a high sensitivity (10 pg of injected analyte); it allows determination of the benzene urinary metabolite even at the low levels occurring in environmental exposures. The method sensitivity is comparable to spectrofluorimetric detectors, although these need one derivatization step, and it is better than gas chromatographic- mass spectrometric methods, which also need derivatization.
Key words: Benzene, S-Phenylmercapturic acid (S-PMA), Metabolite, Biomarker of exposure, HPLC-MS/MS, Electrospray, Ion trap
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